Sequenzierservice

Sequenzierservice und Fragmentanalyse

• zuverlässig
• preiswert
• schnell

Sequenzierung von Plasmid-DNA und PCR-Produkten:
Cycle Sequencing nach dem BigDye™ Terminator-Prinzip und Analyse am Kapillarsequencer von ABI für genaue und zuverlässige Ergebnisse

Anforderungen an Ihre Proben

Template Qualität

Die Qualität des Ausgangsmaterials ist entscheidend für den Erfolg der Sequenzreaktion. Nur bei Verwendung gut gereinigter Templates können große Leseweiten und exzellente Datenqualität garantiert werden. Die DNA bzw. das PCR-Produkt sollte in Wasser gelöst sein. Gerne übernehmen wir die Reinigung für Sie.

Template Quantität

Plasmid-DNA: 0.5 – 1.0 ?g
PCR-Produkt: Länge in bp / 20 = benötigte Menge in ng.
Template DNA in ng
PCR-Produkt: 100 – 200 bp 4 – 5
PCR-Produkt: 200 – 500 bp 10 – 25
PCR-Produkt: 500 – 1000 bp 25-50
PCR-Produkt: 1000 – 2000 bp 40 – 100
Plasmid DNA 500 – 1000

Primer

Wir stellen folgende Primer kostenlos zur Verfügung:

• M13 forward/reverse
• T7 Promotor
• SP6
• HVI forward/reverse
• HVII forward/reverse
• Sie stellen Primer Ihrer Wahl bereit
• (HPLC-gereinigt, 17-25 nt lang, Tm=50–60°C)
• Wir bestellen Primer für Sie (Lieferzeit: 2 – 3 Tage)

Durchführung

Die Produkte der Sequenzreaktion werden von uns mittels Gelfiltration gereinigt und anschließend auf den Genetic Analyzer aufgetragen. Nach der Kapillarelektrophorese erfolgt die Auswertung mit der Sequencing Analysis Software. Sie erhalten Sequenzdateien im ab1- oder fasta- Format bzw. eine Text Datei mit Analysereport.

Selbstverständlich besteht auch die Möglichkeit, die Sequenzreaktion selbst durchzuführen und nur den Lauf Ihrer Proben auf unserem Gerät zu bestellen. Die Ergebnisse werden per Email zugesendet oder sind auf unserer Website mit Benutzer-ID und Passwort abrufbar.

Für die Auswertung und Editierung der Daten finden Sie im Internet folgende Programme kostenlos zum downloaden:

• Sequence Scanner Software v.1.0 von Applied Biosystems
   
• Chromas Lite v.2.01 von Technelysium
   

Fragmentanalyse, Genotypisierung
Kapillarelektrophoretische Auftrennung Ihrer PCR-Produkte im 96-well
Maßstab: „ready to load” Service von voramplifizierten, farbmarkierten Proben

Die Bestimmung der Fragmentgrößen erfolgt durch interne Kalibrierung mit DNA-Fragmenten bekannter Länge (Größenstandard). Bei Mikrosatelliten STRs bieten wir die Genemapper Software zur Zuordnung der Allele an. Sie erhalten fsa-Dateien bzw. eine Text-Datei mit Analysereport.

Dauer der Bereitstellung der Daten i.d.R. 1-2 Tage nach Eingang der Proben.
Rufen Sie 01-3684554 oder mailen Sie uns: office@confidence.at